Biocoll細(xì)胞分離液操作步驟及注意事項(xiàng)詳解

更新時(shí)間：2020-10-26 | 點(diǎn)擊率：1617

　　如何從血液中獲取單個(gè)核細(xì)胞呢？PBMC簡(jiǎn)單常用的方法是利用密度梯度介質(zhì)進(jìn)行分離，利用密度與淋巴細(xì)胞相近且近于等滲的Biocoll細(xì)胞分離液進(jìn)行分離，其成分是高分子的聚蔗糖和泛影酸鈉。

　　Biocoll細(xì)胞分離液操作步驟及注意：

　　1、取全血，使用等量PBS稀釋。（全血：HBSS=1:1）

　　2、取離心管，加入與血稀釋液等量的PBS于管底，將血液稀釋液小心加至PBS液面上層。（小心不要使兩種溶液混合，吸頭接近液面，貼壁緩慢加入，尤其是兩種溶液剛接觸到的時(shí)候，一定要慢！慢！再慢！）

　　3、離心：800g，30min，需要將制動(dòng)降至低，即離心機(jī)自然降速至0，離心完畢將得到如圖所示分層（一定要自然降速，或者只有1-2成的制動(dòng)）

　　4、吸取白膜層至新15mL離心管中。（白膜層為如圖所示部位，一定要小心的吸取，不要吸到血漿和下層的Biocoll細(xì)胞分離液也不要將各層溶液攪混，吸取的時(shí)候可以先將上層血漿吸掉，這樣更好操作。）

　　5、白膜層液體加10~15mlPBS離心，300g，10min，棄上清。沉淀再加PBS清洗一次，棄上清。

　　6、沉淀加入正常培養(yǎng)的*培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)，2~3小時(shí)，使單核細(xì)胞貼壁。

　　7、鏡下觀察細(xì)胞貼壁后，更換培養(yǎng)基，去除未貼壁細(xì)胞，保留下來(lái)的即為所需的單核細(xì)胞。　